timTOF HT

Được hỗ trợ bởi TIMS-XR thế hệ thứ 4 và công nghệ số hóa tiên tiến cho dải động cao và độ sâu phân tích trong tế bào định lượng và protein mô.

Danh mục: Từ khóa: , Brand:

Tách di động ion dựa trên TIMS và phân tích hỗ trợ CCS

Máy quang phổ khối timsTOF HT mới được trang bị máy phân tích TIMS-XR công suất cao thế hệ thứ 4 và công nghệ số hóa tiên tiến (ADT). Nó cung cấp dải động cao hơn cho độ sâu phân tích và định lượng chưa từng có trong các thí nghiệm proteomics thông lượng cao. TimsTOF HT được kích hoạt hoàn toàn CCS và hỗ trợ tất cả các chế độ thu nhận PASEF ® bao gồm PASEF ® , dia-PASEF ®  và prm-PASEF ® để đạt được tính linh hoạt trong 4D-Proteomics™. Đơn giản là độ sâu proteomic không thỏa hiệp ở quy mô.

Tốc độ
Công nghệ PASEF® trên timsTOF HT đạt được tốc độ sắp xếp thứ tự 150 Hz mà không ảnh hưởng đến độ phân giải hoặc độ nhạy.
Mạnh mẽ
Thiết kế thiết bị độc đáo cho phép hiệu suất mạnh mẽ và hoạt động thường xuyên trên hàng ngàn mẫu mà không cần làm sạch.
Độ nhạy
Dung lượng sạc cao của TIMS-XR thế hệ thứ 4 để tăng độ sâu phân tích.
Tính chọn lọc
Thêm khả năng phân tách di động ion vào các khả năng tứ cực và Thời gian bay tiên tiến.

Bruker ProteoScape

Tối đa hóa độ sâu và thông lượng nhận dạng của bạn với các khả năng mới của Bruker ProteoScape, nền tảng tìm kiếm cơ sở dữ liệu “chạy và hoàn thành” của chúng tôi. TIMScore™  và TIMS DIA-NN tận dụng tối đa CCS để nhận dạng protein nhanh chóng chính xác hơn.

Kích hoạt phân tích proteome mô nhanh chóng với dia-PASEF ®

Protein mô tim nhanh. Các lượng khác nhau của chất tiêu hóa proteome tim chuột được phân tích ba lần với gradient sắc ký lỏng ngắn và dia-PASEF ® . Ở tải mẫu cao nhất, chúng tôi đã xác định được trong tổng số 4700 nhóm protein trải dài hơn năm bậc độ lớn về độ phong phú tương đối. Dữ liệu thô được xử lý bằng DIA-NN ở chế độ không có thư viện và số lượng bản sao protein được ước tính bằng phương pháp ‘thước proteomic’.

Độ sâu nổi trội trong các dòng tế bào với dia-PASEF ® , TIMS DIA-NN và Bruker ProteoScape

Đối với độ sâu hệ protein thậm chí còn cao hơn, tải lượng tiêu hóa protein tăng lên sẽ cải thiện khả năng nhận dạng. Phân tích tryptic của dòng tế bào người K562 (Promega) được phân tích bằng hệ thống nanoElute ở tốc độ 250 nL/phút với thời gian phân tách 60 phút trên cột Aurora (25cm, ID 75 μm, IonOpticks). timsTOF HT hoạt động ở chế độ dia-PASEF ® sử dụng khoảng cách TIMS 100 ms. Dữ liệu được xử lý bằng TIMS DIA-NN bằng thư viện dự đoán từ uniprot (do con người đánh giá).

Protein huyết tương được nhắm mục tiêu: định lượng hơn 550 protein với độ dốc 30 phút

Chúng tôi đã kết hợp việc sử dụng Tiêu chuẩn đồng vị ổn định (SIS) PQ500 (Biognosys) với phương pháp tiếp cận dựa trên dia-PASEF ® bằng cách sử dụng độ dốc 30 phút trên timsTOF HT. 578 protein (tương ứng với 804 peptide) có thể được định lượng chính xác với độ đầy đủ dữ liệu > 99%. Cách tiếp cận này kết hợp tính chọn lọc và độ nhạy của các phương pháp SMS/MRM truyền thống với thiết lập thu nhận dễ sử dụng, đồng thời cho phép xác định các mục tiêu mới sau này.

Cột Nano LC cho kết quả tốt nhất với lượng mẫu cao hơn

A) TIMS-XR cho phép tăng dung lượng ion đối với lượng mẫu vượt quá 200 ng. Khả năng nhận dạng lặp lại của ~ 6900 nhóm protein và hơn 86.000 peptide độc ​​đáo.

B) Số lượng nhận dạng bằng cách sử dụng công cụ tìm kiếm thời gian thực Bruker ProteoScape với TIMScore™ cho dda-PASEF lên đến 1600 ng K562 tryptic digest. Các thanh lỗi biểu thị độ lệch chuẩn cho 5 lần lặp lại với giá trị trung bình được hiển thị phía trên biểu đồ.

Sử dụng cột sê-ri PepSep 25 (ID 150 μm, kích thước hạt 1,5 μm), đỉnh trung bình có độ rộng nhỏ hơn năm giây đã đạt được đối với tải mẫu phân hủy tryptic K562 (Promega) lên đến 1600 ng. Thời gian gradient là 41 phút là đủ để tách peptide hiệu quả, dẫn đến quá trình rửa giải peptide đồng nhất trên gradient ngay cả khi tải peptide cao.

Sản phẩm tương tự

Khối phổ timsTOF

timsTOF MALDI PharmaPulse®

Khối phổ timsTOF

timsTOF fleX

Khối phổ MALDI-TOF

rapifleX ® MALDI PharmaPulse ®

Khối phổ timsTOF

timsTOF Pro 2

Khối phổ timsTOF

timsTOF SCP

Khối phổ timsTOF

timsTOF fleX MALDI-2

Khối phổ MALDI-TOF

microflex ® LRF

Khối phổ timsTOF

timsTOF Ultra