Các giải pháp cố định mô phổ biến
Một số giải pháp cố định mô phổ biến được trình bày dưới đây:
- Formol đệm photphat
- Canxi Formol
- Dung dịch muối Formol
- Kẽm Formalin (không đệm)
- Chất cố định Zenker
- Chất cố định Helly
- Chất cố định B-5
- Giải pháp Bouin
- Hollande’s
- Giải pháp Gendre
- Giải pháp Clarke
- Giải pháp Carnoy
- Methacarn
- Cồn formalin
- Cồn axetic formol
1. Formol đệm photphat
Công thức
- Formaldehyde 40%: 100 ml
- Nước cất: 900 ml
- Natri dihydro photphat monohydrat: 4 g
- Dinatri hydro photphat khan 6,5 g
- Dung dịch phải có pH 6,8
- Thời gian cố định: 12 – 24 giờ
Ứng dụng
Chất cố định gốc formaldehyde được sử dụng phổ biến cho mô bệnh học thông thường. Chất đệm có xu hướng ngăn chặn sự hình thành sắc tố formalin. Nhiều epitope yêu cầu thu hồi kháng nguyên để IHC thành công sau khi sử dụng.
2. Canxi Formol
Công thức
- Formaldehyde 40%: 100 ml
- Canxi clorua: 10 g
- Nước cất: 900 ml
- Thời gian cố định: 12 – 24 giờ
Ứng dụng
Được khuyên dùng để bảo quản lipid, đặc biệt là phospholipid.
3. Dung dịch muối Formal
Công thức
- Formaldehyde 40%: 100 ml
- Natri clorua: 9 g
- Nước cất: 900 ml
- Thời gian cố định: 12 – 24 giờ
Ứng dụng
Hỗn hợp formaldehyde trong nước muối đẳng trương được sử dụng phổ biến cho mô bệnh học thông thường trước khi sử dụng formalin đệm photphat. Nó thường tạo ra sắc tố formalin.
4. Kẽm formalin (không đệm)
Công thức
- Kẽm sunfat: 1 g
- Nước khử ion: 900 ml
- Khuấy cho đến khi hòa tan rồi thêm –
- Formaldehyde 40%: 100 ml
- Thời gian cố định: 4 – 8 giờ
Ứng dụng
Dung dịch kẽm formalin là giải pháp thay thế cho công thức clorua thủy ngân, cải thiện chất lượng IHC. Hiện có một số công thức thay thế, trong đó có chứa kẽm clorua, được cho là có tính ăn mòn cao hơn kẽm sunfat
5. Chất cố định Zenker
Công thức
- Nước cất: 950 ml
- Thủy ngân clorua: 50 g
- Kali dicromat: 25 g
- Axit axetic băng: 50 ml
- Thời gian cố định: 4 – 24 giờ
Ứng dụng
Bảo quản nhân tốt nhưng làm tan tế bào hồng cầu do có mặt axit axetic. Đã được khuyên dùng cho các mẫu vật tắc nghẽn và cho kết quả tốt với nhuộm PTAH và nhuộm ba màu. Tạo ra sắc tố thủy ngân cần được loại bỏ khỏi các phần trước khi nhuộm và có thể tạo ra sắc tố crom nếu mô không được rửa trong nước trước khi xử lý. Là chất không dung nạp nên sau khi rửa bằng nước, mô phải được bảo quản trong ethanol 70%.
6. Chất cố định Helly
Công thức
- Nước cất: 1000 ml
- Kali dicromat: 25 g
- Natri sunfat: 10 g
- Thủy ngân clorua: 50 g
- Ngay trước khi sử dụng thêm –
- Formaldehyde 40%: 50ml
- Thời gian cố định: 4 – 24 giờ
Ứng dụng
Lý tưởng cho tủy xương, tạo máu ngoài tủy và các đĩa xen kẽ của cơ tim.
Tạo ra sắc tố thủy ngân cần được loại bỏ khỏi các phần trước khi nhuộm và có thể tạo ra sắc tố crom nếu mô không được rửa trong nước trước khi xử lý. Là chất không dung nạp nên sau khi rửa bằng nước, mô phải được bảo quản trong ethanol 70%. Do độ pH thấp nên sắc tố formalin cố định này cũng có thể xảy ra.
7. Chất cố định B-5
Công thức
Giải pháp
- Thủy ngân clorua: 12 g
- Natri axetat khan: 2,5 g
- Nước cất: 200 ml
Dung dịch cần chuẩn bị ngay trước khi sử dụng
- Dung dịch gốc B-5: 20 ml
- Formaldehyde 40%: 2ml
- Thời gian cố định: 4 – 8 giờ
Ứng dụng
Mặc dù có chứa hàm lượng thủy ngân và các vấn đề liên quan đến việc xử lý, chất cố định này rất phổ biến để cố định mô tạo máu và bạch huyết. Nó tạo ra chi tiết nhân chất lượng, mang lại kết quả tốt với nhiều vết nhuộm đặc biệt và được khuyên dùng cho ỊHC. Các phần sẽ yêu cầu loại bỏ sắc tố thủy ngân trước khi nhuộm. Mô không nên được bảo quản trong chất cố định này mà nên đặt trong ethanol 70%.
8. Giải pháp Bouin
Công thức
- Dung dịch nước bão hòa axit picric. (2,1%): 750ml
- Formaldehyde 40%: 250 ml
- Axit axetic băng: 50 ml
- Thời gian cố định: 4 – 18 giờ
Ứng dụng
Cho kết quả rất tốt với mô sau đó được nhuộm ba màu. Bảo quản tốt glycogen nhưng thường làm tan hồng cầu. Đôi khi được khuyên dùng cho sinh thiết đường tiêu hóa, phôi động vật và mô tuyến nội tiết. Vết mô màu vàng sáng do axit picric. Lượng picric dư phải được rửa sạch khỏi mô trước khi nhuộm bằng ethanol 70%. Do tính chất axit nên nó sẽ từ từ loại bỏ các cặn canxi và sắt nhỏ.
9. Hollande
Công thức
- Đồng axetat: 25 g
- Axit picric: 40 g
- Formaldehyde 40%: 100 ml
- Axit axetic: 15ml
- Nước cất: 1000 ml
Hòa tan hóa chất trong nước cất không cần làm nóng
- Thời gian cố định: 4 – 18 giờ
Ứng dụng
Được khuyên dùng cho các mẫu bệnh phẩm đường tiêu hóa và cố định mô nội tiết. Sản xuất ít ly giải hơn Bouin. Có một số đặc tính khử canxi
Chất cố định phải được rửa sạch khỏi mô nếu chúng được đưa vào formalin đệm photphat trên máy xử lý vì sẽ hình thành chất kết tủa photphat không hòa tan
10. Giải pháp Gendre
Công thức
- Ethanol 95% bão hòa axit picric: 800 ml
- Formaldehyde 40%: 150ml
- Axit axetic băng: 50 ml
- Thời gian cố định: 4 – 18 giờ
Ứng dụng
Đây là một giải pháp Bouin có cồn dường như cải thiện tình trạng lão hóa. Nó rất được khuyến khích để bảo quản glycogen và các carbohydrate khác. Sau khi cố định, mô được đặt vào ethanol 70%. Màu vàng còn sót lại phải được rửa sạch trước khi nhuộm.
11. Giải pháp Clarke
Công thức
- Ethanol (tuyệt đối): 75 ml
- Axit axetic băng: 25 ml
- Thời gian cố định: 3 – 4 giờ
Ứng dụng
Đã được sử dụng trên các phần cắt lạnh. Có thể tạo ra kết quả vừa phải sau khi xử lý thông thường với điều kiện thời gian cố định mô được giữ rất ngắn. Bảo tồn axit nucleic, nhưng tách lipid. Các mô có thể được chuyển trực tiếp vào ethanol 95%.
12. Giải pháp Carnoy
Công thức
- Ethanol tuyệt đối: 60 ml
- Cloroform: 30 ml
- Axit axetic băng: 10 ml
- Thời gian cố định: 1 – 4 giờ
Ứng dụng
Tác dụng nhanh, bảo toàn nhân tốt và giữ lại glycogen. Nó làm ly giải hồng cầu và hòa tan lipid và có thể tạo ra sự cứng và co rút quá mức.
13. Metacarn
Công thức
- Metanol tuyệt đối: 60 ml
- Cloroform: 30 ml
- Axit axetic băng: 10 ml
- Thời gian cố định: 1 – 4 giờ
Ứng dụng
Tính chất tương tự như Carnoy nhưng ít co ngót và cứng hơn.
14. Cồn formalin
Công thức
- Formaldehyde 40%: 100 ml
- Ethanol 95%: 900ml
- Có thể thêm 0,5 g canxi axetat để đảm bảo tính trung lập
- Thời gian cố định: 12 – 24 giờ
Ứng dụng
Kết hợp chất cố định biến tính với tác dụng phụ gia và liên kết ngang của formalin. Đôi khi được sử dụng trong quá trình xử lý để hoàn tất quá trình cố định mô sau quá trình cố định formalin sơ cấp chưa hoàn chỉnh. Có thể được sử dụng để cố định hoặc sau cố định các mẫu mỡ lớn (đặc biệt là vú) vì nó sẽ cho phép phát hiện các hạch bạch huyết dễ dàng hơn vì nó làm sạch và chiết xuất lipid. Nếu được sử dụng để cố định lần đầu, mẫu có thể được đặt trực tiếp vào ethanol 95% để xử lý.
15. Cồn axetic formol
Công thức
- Ethanol tuyệt đối: 85 ml
- Formaldehyde 40%: 10ml
- Axit axetic băng: 5 ml
- Thời gian cố định: 1 – 6 giờ
Ứng dụng
Một chất tác dụng nhanh hơn formalin có cồn do sự hiện diện của axit axetic cũng có thể tạo ra sắc tố formalin. Đôi khi được sử dụng để làm thay đổi các phần lạnh chẩn đoán. Nếu được sử dụng để cố định lần đầu, mẫu có thể được đặt trực tiếp vào ethanol 95% để xử lý.
Giải pháp cố định độc quyền
Trong vài năm gần đây, ngày càng có nhiều chất cố định độc quyền được phát triển để sử dụng trong mô bệnh học và nghiên cứu y học. Chúng thường được bán trên thị trường dưới dạng thay thế ít nguy hiểm hơn cho các chất cố định formalin truyền thống hoặc là chất thay thế ít độc hơn cho các hỗn hợp cố định có chứa thủy ngân như B5.
Mặc dù phải cung cấp MSDS nhưng thành phần chính xác của những thuốc thử này thường không được công bố và người dùng tiềm năng phải thực hiện mô tả chung về thuốc thử. Những chất được khuyên dùng thay thế cho B5 và Zenker’s (thường được sử dụng để cố định các mô bạch huyết và tạo máu) thường chứa muối kẽm hoặc bari và tỷ lệ formaldehyde thấp, trong khi các chất thay thế formalin trực tiếp thường chứa glyoxal và các thành phần khác. Nhóm sau chứa các thuốc thử được khuyên dùng để cố định bằng microwave. Ethanol, metanol và isopropanol được bao gồm trong một số công thức.
Nên sử dụng chất cố định nào?
Ở hầu hết các phòng thí nghiệm, chất cố định thông thường hoặc các chất cố định đã được chọn và sử dụng trong một thời gian đáng kể trên nhiều loại mẫu vật. Nhà nghiên cứu bệnh học, nhà mô học hoặc nhà nghiên cứu đã làm quen với việc giải thích hình thái mô đặc trưng được tạo ra bởi một lịch trình xử lý và cố định cụ thể. Thông thường nhất, chất cố định thông thường sẽ là formalin đệm trung tính cùng với các chất khác được sử dụng cho trephin tủy xương (có thể là formalin kẽm), sinh thiết thận, các phần đông lạnh, v.v. Formalin đệm được sử dụng phổ biến vì nó có lẽ là chất linh hoạt nhất. Nó có thể được tích hợp vào lịch trình xử lý trên các bộ xử lý mô kèm theo. Nó cho phép ứng dụng thành công nhiều loại nhuộm đặc biệt. Các phương pháp hóa mô miễn dịch, thường bao gồm bước thu hồi kháng nguyên, đã được tối ưu hóa cho các mô được cố định bằng formalin và các mẫu mô có thể được lưu trữ trong formalin trong thời gian dài mà không có tác dụng phụ lớn. Các kỹ thuật phân tử như ISH cũng đã được xác nhận để sử dụng trên mô cố định bằng formalin. Chính vì những đặc điểm này mà chất cố định mới hoặc chất cố định thay thế phải được đánh giá.
Một số phòng thí nghiệm hiện đang tìm cách thay thế formalin bằng thuốc thử ít độc hơn và có một số lựa chọn thay thế được mô tả trong các đoạn trước. Trong môi trường nghiên cứu, nơi một thành phần mô cụ thể đang được nghiên cứu, có thể có nhiều quyền kiểm soát hơn đối với bước cố định và cần thử nghiệm một số thuốc thử trước khi đưa ra quyết định cuối cùng. Nếu bạn đang dự định thay đổi chất cố định, hãy xem xét các đặc tính sau ngoài việc đánh giá kết quả bạn nhìn thấy dưới kính hiển vi:
- Độc tính của chất cố định (cả ngắn hạn và tích lũy)
- Sự biến động của các thành phần của nó và thiết bị có sẵn để ngăn cản nhân viên tiếp xúc với tác nhân
- Tính dễ cháy
- Ảnh hưởng của việc cố định quá mức lên các mô (việc cố định kéo dài có làm hỏng mô không?)
- Yêu cầu bảo quản nếu mẫu vật không thể được cố định
- Khả năng tương thích của chất cố định với bộ xử lý mô của bạn (nó có thể làm hỏng mô không?)
- Các yêu cầu thực tế và pháp lý về việc xử lý sau khi sử dụng
Việc thay đổi sang một chất cố định khác đòi hỏi phải xem xét cẩn thận và đánh giá kỹ lưỡng.
Minh Khang là nhà phân phối và nhập khẩu trực tiếp các thiết bị Giải phẫu bệnh từ hãng Leica Biosystems.
EN