Định nghĩa Nhuộm đặc biệt
Nhuộm đặc biệt là thuật ngữ dùng để chỉ nhiều kỹ thuật nhuộm thay thế được sử dụng khi H&E truyền thống không cung cấp tất cả thông tin mà nhà nghiên cứu bệnh học từ một mẫu mô. Nhuộm đặc biệt là các quy trình thường sử dụng thuốc nhuộm hoặc hóa chất có ái lực với thành phần mô cụ thể cần được chứng minh. Chúng cho phép quan sát sự hiện diện/hoặc vắng mặt của một số loại tế bào, cấu trúc và/hoặc vi sinh vật nhất định bằng kính hiển vi. Nhuộm đặc biệt tồn tại rất lâu trước khi có kỹ thuật hóa mô miễn dịch (IHC) và/hoặc kỹ thuật sinh học phân tử (máy dò).
Mô liên kết – Giới thiệu
Mô liên kết hỗ trợ cơ thể bằng cách cung cấp một chất nền kết nối và liên kết các tế bào và cơ quan. Có ba loại mô liên kết trong cơ thể.
Collagen là một loại protein mạnh và là thành phần chính của dây chằng và gân. Nó cũng chịu trách nhiệm về độ đàn hồi của da và là loại dễ thấy nhất có thể được thể hiện qua H&E.
Các sợi đàn hồi nằm ở da và thành mạch máu. Chúng được cấu tạo từ Elastin – một loại protein linh hoạt và cho phép nhiều mô trong cơ thể lấy lại hình dạng ban đầu sau khi giãn ra hoặc co lại và không thể nhìn thấy được qua H&E.
Các sợi lưới được cấu tạo từ collagen và tạo thành một khung mỏng manh xung quanh các sợi thần kinh, tế bào mỡ, hạch bạch huyết, các sợi cơ trơn và cơ xương. Chúng cũng không nhìn thấy được khi nhuộm H&E
Các vết nhuộm được sử dụng phổ biến nhất để xác định mô liên kết
Ba màu – Masson
Ba loại thuốc nhuộm được sử dụng để nhuộm chọn lọc bao gồm cơ (đỏ), sợi collagen (xanh), hồng cầu (đỏ) và nhân (đen).
Thuốc nhuộm được sử dụng để nhuộm sinh thiết gan nhằm xác định mức độ xơ hóa như trong bệnh xơ gan cũng như sinh thiết thận để làm nổi bật màng đáy và chứng minh sự lắng đọng miễn dịch. Thuốc nhuộm cũng được sử dụng để phân biệt giữa cơ trơn và collagen trong khối u và xác minh sự gia tăng collagen.
Quy trình
Kết quả
Cách thức
Thời gian ủ có thể thay đổi theo hướng dẫn của nhà sản xuất
| 1. | Đặt lam kính xuống nước | |
| 2. | Ủ trong Bouin’s – hoạt động như chất gắn màu để liên kết thuốc nhuộm với mô. | |
|
Thường qua đêm | |
|
10-15 phút | |
| 3. | Rửa sạch dưới vòi nước để loại bỏ hết dấu vết của Bouin’s | |
| 4. | Hematoxylin của Weigert | 5-10 phút |
| 5. | Rửa sạch dưới vòi nước | 5 phút |
| 6. | Biebrich đỏ tươi | 15 phút |
| 7. | Rửa sạch dưới vòi nước | |
| 8. | Axit Phosphotungstic-phosphomolybdic | 15 phút |
| 9. | Thành màu xanh anilin (không cần rửa) | 5 phút |
| 10. | Axit axetic băng 1% | 1-3 phút |
| 11. | Rửa sạch dưới vòi nước | |
| 12. | Khử nước, làm sạch và dính kết |
Xử lý Trichrome:
Điều cần thiết là sử dụng Bouin tốt với thời gian ủ thích hợp ở nhiệt độ thích hợp được sử dụng. Phân biệt hoàn toàn bằng axit Phosphotungstic-phosphomolybdic của collagen đến mức loại bỏ hết màu đỏ. Nếu cơ có màu đỏ nhạt, hãy kiểm tra khả năng tồn tại của Bouin’s và/hoặc Biebrich đỏ tươi. Nếu collagen quá nhạt, hãy giảm thời gian ủ trong Glacial Acetic Acid (GLAA) 1%.
One Step Trichrome – Gomori’s
Một giải pháp nhuộm tất cả: cơ, sợi collagen, fibrin và hồng cầu. Có hai công thức nhuộm collagen: xanh dương và xanh lá cây.
Quy trình
Kết quả
Cách thức
Thời gian ủ có thể thay đổi theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
| 1. | Đặt lam kính xuống nước | |
| 2. | Ủ trong Bouin’s – hoạt động như chất gắn màu để liên kết thuốc nhuộm với mô | |
|
thường là qua đêm | |
|
10-15 phút | |
| 3. | Rửa sạch dưới vòi nước chảy để loại bỏ hết dấu vết của Bouin’s | |
| 4. | Hematoxylin của Weigert | 5-10 phút |
| 5. | Rửa sạch dưới vòi nước chảy | 5 phút |
| 6. | Giải pháp xanh/xanh một bước | 15 phút |
| 7. | Axit axetic băng thẳng đến 1% | 1 phút |
| 8. | Rửa sạch dưới vòi nước chảy | |
| 9. | Khử nước, làm sạch và gắn kết |
Nhuộm đàn hồi Verhoeff-van Gieson
Nhuộm đàn hồi Verhoeff-van Gieson được sử dụng để xác định tình trạng teo mô đàn hồi như trong khí thũng, bằng chứng về các bệnh mạch máu (xơ cứng động mạch) và sự xâm lấn của khối u vào mạch máu.
Quy trình
Kết quả
Cách thức
Thời gian ủ có thể thay đổi theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
| 1. | Đặt lam kính xuống nước | |
| 2. | Dung dịch xử lý vết bẩn đàn hồi Verhoeff (theo nhà sản xuất) | 15 phút |
| 3. | Rửa sạch bằng nước chảy | |
| 4. | Phân biệt clorua sắt 2% | 1-2 phút |
| 5. | Rửa sạch dưới vòi nước | 5-10 phút |
| 6. | 5% natri thiosulfat | 1 phút |
| 7. | Rửa sạch dưới vòi nước | |
| 8. | Chất phản màu trong dung dịch van Gieson | 30 giây -1 phút |
| 9. | Bỏ qua 95% và khử nước nhanh chóng ở 100 x 2 | |
| 10. | Khử và dính kết |
Xử lý vết nhuộm đàn hồi:
Dung dịch Verhoeff cần phải mới sau mỗi lần sử dụng do quá trình oxy hóa nhanh chóng. Đừng phân biệt quá mức clorua sắt vì các phân tử thuốc nhuộm yêu thích chất này như nhau cũng như chúng thích các phân tử mô mà chúng liên kết và sẽ dễ dàng tách ra khỏi mô. Nếu điều này xảy ra, bạn sẽ phải bắt đầu lại từ đầu. Ủ trong vài giây sau đó rửa nhanh và quan sát dưới kính hiển vi để tìm các sợi mô đàn hồi. Khi chúng có màu đen và dễ dàng phân biệt với collagen và các loại mô khác thì hãy dừng quá trình này.
Tương tự như vậy, không ủ quá lâu trong van Gieson vì axit picric trong dung dịch sẽ tiếp tục phân biệt hematoxylin liên kết.
Sợi Reticulin của Gomori
Sợi reticulin hỗ trợ cơ thể và phổ biến ở gan, lá lách và thận. Các mẫu reticulin đặc trưng có thể giúp chẩn đoán bệnh xơ gan, xơ hóa sớm ở tủy xương, các khối u bao gồm: hemangiosarcomas – khối u tế bào lót mạch máu, khối u nguyên bào sợi và rhabdomyosarcomas – khối u cơ bám vào xương. Họ cũng có thể giúp chẩn đoán khối u biểu mô và không biểu mô.
Thuốc nhuộm Reticulin sử dụng bạc và dựa vào đặc tính ưa argyrophil của sợi. Các tế bào ưa argyrophilic có thể hấp thụ bạc nhưng không thể khử được bạc. “Hấp phụ” là một quá trình diễn ra trên bề mặt, trong khi “hấp thụ” có nghĩa là có sự thẩm thấu qua mô. Các tế bào ưa argyrophilic cần chất khử/chất phát triển để chuyển muối bạc vô hình thành bạc kim loại nhìn thấy được.
Quy trình
Kết quả
Cách thức
| 1. | Đặt lam kính xuống nước | |
| 2. | Oxy hóa trong thuốc tím | 10 phút |
| 3. | Rửa sạch dưới vòi nước | 3 phút |
| 4. | Axit oxalic | 1 phút |
| 5. | Rửa sạch dưới vòi nước | 2 phút |
| 6. | Nhạy với sắt amoni sunfat | 15 phút |
| 7. | Rửa sạch bằng nước cất | 2 phút |
| 8. | Ngâm trong bạc amoniac | 2 phút |
| 9. | Rửa sạch bằng nước cất | 1 phút |
| 10. | Phát triển trong formalin 20% không đệm | 1 phút |
| 11. | Rửa sạch dưới vòi nước | 2 phút |
| 12. | Tông màu vàng clorua 0,1% | 3-5 phút |
| 13. | Rửa sạch trong nước | 1 phút |
| 14. | 5% natri thiosulfat | 1 phút |
| 15. | Rửa sạch trong nước | 1 phút |
| 16. | Phản ánh màu đỏ hạt nhân nhanh | 3-5 phút |
| 17. | Rửa sạch một thời gian ngắn trong nước | 15 giây |
| 18. | Khử nước, làm sạch và dính kết |
Xử lý reticulin của Gomori :
Dung dịch bạc phải được pha mới bằng nước cất và dụng cụ thủy tinh sạch (không cần làm sạch bằng axit). Hãy cẩn thận để làm cho bạc. Sử dụng amoni hydroxit cũ đã cạn kiệt amoniac có thể làm cho dung dịch bị hỏng. Không sử dụng quá nhiều amoni hydroxit để làm sạch dung dịch bạc/natri hydroxit. Lượng amoni hydroxit dư thừa sẽ gây ra vết nhuộm yếu.
Cách làm bạc amoniac:
Cách thể hiện Collagen, sợi đàn hồi, sợi lưới, nhân và cơ chỉ bằng một quy trình
Movat Pentachrome
Movat Pentachrome là một loại vết mô siêu liên kết. Nó được sử dụng để nghiên cứu mô tim, mạch máu và các bệnh về mạch máu và phổi. Do sự phân biệt tuyệt vời của các sợi collagen, đàn hồi, fibrin và cơ, Movat có thể bộc lộ những thay đổi tinh tế mà các vết bẩn đặc biệt thông thường và thông thường không làm được.
Quy trình
Kết quả
Cách thức
Thời gian ủ và trình tự thuốc thử có thể khác nhau tùy theo nhà sản xuất nhưng kết quả thì tương tự nhau.
| 1. | Đặt lam kính xuống nước | |
| 2. | Nhuộm xanh Alcian | 20 phút |
| 3. | Rửa sạch dưới vòi nước | 5 phút |
| 4. | Rượu kiềm | 60 phút |
| 5. | Rửa sạch dưới vòi nước | 10 phút |
| 6. | Rửa sạch bằng nước cất | |
| 7. | Giải pháp đàn hồi của Verhoeff | 12-15 phút |
| 8. | Nước cất x 2 | |
| 9. | Sắt clorua | 2 đến 3 lần nhúng |
| 10. | Rửa sạch bằng nước cất | |
| 11. | Natri thiosulfat | 1 phút |
| 12. | Rửa sạch dưới vòi nước | 5 phút |
| 13. | Croceine đỏ tươi – axit fuchsin | 90 giây – 3 phút |
| 14. | Nước cất x 2 | |
| 15. | 0,5% nước axit axetic | |
| 16. | Axit photphotungstic 5% x 2 | mỗi lần 5 phút |
| 17. | 0,5% nước axit axetic | |
| 18. | Cồn etilic x 3 | Giảm nhanh |
| 19. | Safran | 15 phút |
| 20. | Cồn etilic x 2 | |
| 21. | Khử và dính kết |
Xử lý Movat Pentachrome
Màu xanh Alcian nên được sử dụng ở PH 2,5. Loại bỏ hoàn toàn rượu kiềm là điều cần thiết để nhuộm màu tốt. Dung dịch Verhoeff phải được làm mới trước mỗi lần sử dụng vì nó oxy hóa nhanh. Hãy cẩn thận để không phân biệt quá mức các sợi đàn hồi trong clorua sắt. Nhúng một hoặc hai lần rồi rửa lại bằng nước cất và kiểm tra bằng kính hiển vi. Lặp lại khi cần thiết. Không sử dụng cồn đã được phân loại để khử nước mà bắt đầu bằng cồn etilic. Không để các phần bị khô trong quá trình nhuộm.
Minh Khang là nhà nhập khẩu và phân phối trực tiếp các sản phẩm hãng Leica Biosystems.
EN