Nhuộm đặc biệt – Phần 1: Mucins và Glycogen

Chất nhầy là một phần của một nhóm phức tạp gọi là carbohydrate. Chúng có thể được định nghĩa đơn giản là đường và tinh bột. Carbohydrate được chia thành monosacarit, polysacarit và mucopolysacarit. Chất nhầy được giải thích là chuỗi dài các phân tử đường – mucopolysacarit, được tìm thấy khắp cơ thể và cần thiết cho sự sống và có ý nghĩa quan trọng trong việc duy trì tính toàn vẹn cấu trúc của xương, sụn, da, mô đàn hồi và màng. Chúng đóng vai trò quan trọng trong sự phát triển của tế bào vì chúng giúp điều chỉnh dòng chảy chất dinh dưỡng giữa mao mạch và tế bào.

Có hai loại Chất nhầy phổ biến:

Chất nhầy axit mang điện tích âm trên các phân tử Chất nhầy và có thể được phân loại là đơn giản (thêm nhóm carboxyl) hoặc phức tạp (thêm nhóm axit sunfuric). Chúng hiện diện rộng rãi khắp đường tiêu hóa và hô hấp.

Chất nhầy trung tính thiếu nhóm axit và không mang điện tích. Chúng được tìm thấy trong biểu mô của dạ dày và tuyến Brunner của tá tràng. Chúng bảo vệ niêm mạc tá tràng khỏi hàm lượng axit dạ dày, giúp hấp thu bằng cách cung cấp môi trường kiềm cho các enzyme tiêu hóa và bôi trơn thành ruột và biểu mô tuyến tiền liệt.

Chất nhầy axit – 3 loại thuốc nhuộm thường dùng:

1) Nhuộm xanh Alcian

Nhuộm xanh Alcian là thuốc nhuộm cơ bản có chứa đồng, tạo cho nó màu xanh lam. Các phân tử vết bẩn mang điện tích dương và bị hút bởi các Chất nhầy âm. Việc điều chỉnh độ PH của dung dịch Alcian cho phép xác định các loại axit mucins.

Ph 2.5 – được coi là chất nhuộm Chất nhầy toàn diện:

• Các chất nhầy đơn giản được carboxyl hóa (có tính axit thấp) như mô liên kết và sụn
• Tế bào cốc trong thực quản Barrett

Ph 1.0 sẽ thể hiện các Chất nhầy phức hợp sunfat hóa (có tính axit cao) trong:

• Tế bào cốc ruột lớn
• Các tuyến huyết thanh phế quản
• Ung thư biểu mô tuyến

Ví dụ về mô thường nhuộm dương tính với Chất nhầy bằng quy trình nhuộm xanh Alcian:

•  Tế bào cốc ruột

• Tế bào cốc thực quản Barrett

• Vỏ nhầy của sinh vật – Cryptococcus

• Hạt tế bào mast – tế bào miễn dịch được tìm thấy ở hầu hết các mô và có chức năng như phản ứng miễn dịch

Ví dụ về quá trình bệnh được xác định bởi thuốc nhuộm xanh Alcian:

• Khối u nhầy
  • Ung thư biểu mô bao gồm ít nhất 60% chất nhầy
  • Các khối u nhầy chiếm khoảng 10 – 15% tổng số ung thư biểu mô tuyến
  • Ung thư biểu mô tuyến được xác nhận là sản xuất chất nhầy
• Phù niêm – một loại sưng tấy (phù nề) với sự tích tụ chất nhầy bất thường ở da và các mô khác
• Myxoma – một khối u lành tính hiếm gặp của tim, có thể phát triển để cản trở lưu lượng máu và có thể gây tử vong

Quy trình

Quy trình – Thời gian ủ có thể khác nhau tùy theo nhà sản xuất

1.	Đặt lam kính xuống nước
2.	Thuốc nhuộm xanh Alcian – chọn PH thích hợp	30 phút
3.	Rửa sạch dưới vòi nước	2 phút
4.	Thuốc nhuộm Kernechtrot	2 phút
5.	Rửa sạch một thời gian ngắn dưới vòi nước
6.	Khử nước, làm sạch và dính kết

Xử lý vết nhuộm Alcian:

Thuốc nhuộm Kernechtrot nên được trộn đều trước khi sử dụng để có kết quả tốt nhất vì nó có xu hướng lắng ra khỏi dung dịch và sẽ không tạo ra màu nhuộm tốt. Đảm bảo Alcian sử dụng độ PH thích hợp để ngăn ngừa khả năng xảy ra âm tính giả.

2) Keo sắt

Keo sắt được sử dụng để phân biệt chất nhầy axit. Nó thường được sử dụng để thay thế vết nhuộm xanh Alcian do độ nhạy cao hơn đối với chất nhầy axit khi phát hiện số lượng rất nhỏ. Nó được sử dụng để chẩn đoán một số ung thư biểu mô tế bào thận và một số ung thư trung biểu mô – một dạng ung thư hiếm gặp phát triển từ các tế bào biến đổi có nguồn gốc từ trung biểu mô.

Quá trình

Các ion sắt tích điện dương hút bởi các phân tử chất nhầy âm. Các ion sắt kèm theo sau đó được xử lý bằng kali ferrocyanide/HCL để tạo thành cặn màu xanh sáng có thể nhìn thấy được.

Quy trình – Thời gian ủ có thể khác nhau tùy theo nhà sản xuất

1.	Đặt lam kính xuống nước
2.	Ủ trong 12% GLAA (axit axetic băng)	12 phút
3.	Dung dịch keo sắt	60 phút
4.	Rửa sạch bằng GLAA 12%	3 phút
5.	Rửa sạch trong GLAA 12% lần 2	3 phút
6.	Ferrocyanide – Dung dịch axit clohydric	20 phút
7.	Rửa sạch dưới vòi nước	2 phút
8.	Thuốc nhuộm Kernechtrot	5 phút
9.	Rửa sạch dưới vòi nước
10.	Khử nước, làm sạch và dính kết

Xử lý keo sắt – Xử lý vết nhuộm Hemosiderin không đặc hiệu:

• Chuẩn bị hai lam kính giống nhau có nhãn A và B
• Ủ lam kính A trong toàn bộ quy trình
• Ủ lam kính B sau khi đã bù nước trong dung dịch Kali Ferrocyanide – HCL
• Trong quá trình phân tích mô xét nghiệm, bỏ qua bất kỳ vết màu nào trên lam kính B có thể thấy trên lam kính A

3) Mucicarmine – Một chất nhuộm rất đặc hiệu cho chất nhầy có nguồn gốc biểu mô

Rất lâu trước khi có các quy trình hóa mô miễn dịch, nhuộm Mucicarmine đã được sử dụng để xác minh sự hiện diện của ung thư biểu mô vòng signet, một dạng ung thư biểu mô tuyến ác tính cao hiếm gặp tạo ra chất nhầy. Đó là một khối u ác tính biểu mô được đặc trưng bởi sự xuất hiện mô học của các tế bào vòng Signet

Ung thư biểu mô tế bào vòng Signet được chứng minh bằng ba phương pháp:

Thuốc nhuộm Mucicarmine cũng được sử dụng để phân biệt giữa ung thư biểu mô tế bào vảy âm tính với chất nhầy và ung thư biểu mô tuyến dương tính với chất nhầy.

Ví dụ bổ sung về nhuộm dương tính với mucicarmine:

Quy trình

Carmine, một loại thuốc nhuộm thu được từ cơ thể nghiền thành bột của bọ cánh cứng, được liên kết thành dung dịch với muối nhôm (một quá trình gọi là cầm màu) tương tự như hematoxylin. Điều này tạo ra một phức hợp tích điện dương hút bởi phân tử chất nhầy axit âm.

Quy trình – Thời gian ủ có thể khác nhau tùy theo nhà sản xuất

Xử lý vết nhuộm Mucicarmine:

Làm theo hướng dẫn của nhà sản xuất để tạo ra Mucicarmine hoạt động. Nhớ pha loãng theo hướng dẫn và sử dụng nước thích hợp để pha loãng. Để nó lâu hơn trong dung dịch kém hoặc nhuộm trong chất nhầy không pha loãng sẽ không mang lại cho bạn kết quả như mong muốn. Sử dụng Wiegert’s tươi – nếu Wiegert không có màu tím mà có màu nâu hơn, nó đã bị hỏng và nhân của bạn sẽ không được nhuộm màu đúng cách. Quy trình Wiegert có thể kéo dài cả ngày nhưng thường không phải qua đêm. Hãy đánh sáng màu vàng metanil vì nó là chất tẩy màu.

Chất nhầy trung tính