John Stock, Chuyên gia hỗ trợ kỹ thuật cao cấp của Leica Biosystems cung cấp hướng dẫn toàn diện về cách đạt được kết quả cắt lạnh tốt hơn. Ông trình bày về cách lắp đặt và thiết lập thiết bị, chuẩn bị mô mẫu, đông lạnh mô và cách lấy các lát cắt mô tốt hơn.
Các câu hỏi có trong tài liệu bao gồm lời khuyên về việc xé mô, giữ mẫu ở nhiệt độ thấp khi làm việc và ưu tiên dao cắt high hoặc low-profile
Hỏi & Đáp từ John Stock, Chuyên gia hỗ trợ kỹ thuật cao cấp
1. Ông có mẹo nào để cắt các phần ở nhiệt độ -20 oC để bám vào các phiến kính cũng phải ở nhiệt độ -20 oC đối với các mẫu không thể làm nóng cho các ứng dụng tiếp theo không?
Một trong những vấn đề chính với các phiến kính lạnh là chúng có thể thu hút độ ẩm. Chúng thường ở gần phía trước của buồng đông lạnh và được di chuyển xung quanh trong cột không khí, điều này sẽ thu hút độ ẩm và độ ẩm giữa mẫu và kính có thể ngăn cản sự bám dính. Vì vậy, hãy cố gắng đảm bảo rằng kính khô và không có độ ẩm. Khi người dùng đang làm việc trong buồng đông lạnh thì độ ẩm từ hơi thở cũng có thể đi về phía trước vào buồng. Hãy thử đóng buồng, nhưng điều đó cũng có thể giúp giữ lại độ ẩm trong buồng bên trong và vẫn tuần hoàn.
Các loại slide khác nhau có thể cho phép bám dính tốt hơn, vì vậy hãy thử các loại slide khác nhau. Đảm bảo slide rất khô và thử các loại keo dán khác nhau có thể cho phép thực hiện dán lam tốt hơn.
2. Nhiệt độ phải giảm nhanh như thế nào từ -20 oC xuống -50 oC khi sử dụng chức năng đông lạnh vật thể nhanh của CM3050S và điều này có quan trọng để đạt được kết quả không?
Điều này đề cập đến chức năng đông lạnh nhanh mà vật thể có thể giảm xuống đến -50 oC. Điều này không cần thiết. Bởi vì đó là một khu vực rất nhỏ mà nó đang làm lạnh, nó sẽ nguội khá nhanh và sau đó nó sẽ không mất 4 giờ để nguội xuống. Vì đầu làm lạnh đã ở mức -20 oC, việc giảm xuống -50 oC có thể mất khoảng 15 phút đến nửa giờ tùy thuộc vào nhiệt độ buồng, nhưng nó sẽ nguội rất nhanh vì đó là hệ thống làm mát cục bộ cho đầu mẫu.
3. Liên quan đến giới hạn khoảng cách đến các thiết bị khác khi bố trí máy cắt lạnh trong phòng thí nghiệm, điều này có áp dụng cho máy cắt lạnh lớn hơn như CM3600 không?
Máy cắt lạnh định dạng lớn có thể làm lạnh được một con khỉ Rhesus, như Leica Biosystems CM3600S. Khoảng cách xung quanh máy có thể không cần thiết cho hoạt động của hệ thống làm lạnh vì tôi tin rằng nó có hệ thống làm lạnh kép, nhưng chỉ người dùng, có không gian để đi lại xung quanh thiết bị và làm việc từ các phía khác nhau. Cửa buồng mở từ một phía, nhưng để có thể làm việc hoặc đi lại xung quanh thiết bị, tôi cho rằng ít nhất một feet nói chung xung quanh toàn bộ thiết bị, để có đủ không khí lạnh có thể tiếp cận các mặt sau và các lỗ thông hơi làm lạnh trên thiết bị.
4. Mực sử dụng trong vùi mô có ảnh hưởng gì đến bất kỳ ứng dụng nào sau này không?
Chúng tôi không thể đảm bảo điều đó. Mực để giúp xác định các vùng mô và một số sắc tố đó có thể có tác động sau này khi mực khô. Vì vậy, tôi không chắc chắn và tôi phải xem lại SDS để xem dung môi nào giúp phân tán sắc tố, ví dụ, nếu đó là dầu hoặc thường chỉ là cồn hoặc nước, nhưng khi dung môi đó bốc hơi, và tôi không chắc điều đó sẽ diễn ra nhanh như thế nào, nó vẫn sẽ để lại sắc tố và các sắc tố có thể là các mảnh vụn nền có thể xuất hiện trên các mẫu của bạn sau này.
5. Về hướng dẫn chống cuộn (anti-roll guide), nó có thể gây cản trở khi lấy lát cắt, hoặc đôi khi không hỗ trợ việc lấy lát cắt và tạo ra những nếp cuộn. Bạn sẽ khắc phục vấn đề này như thế nào?
Hướng dẫn chống cuộn (anti-roll guide) thường sẽ gập xuống qua bộ giữ dao trước khi bạn cắt lát. Khi bạn có được lát cắt, nó sẽ nâng lên khỏi vị trí, có thể lật sang trái hoặc gập về phía trước. Thường có điện tĩnh có thể kéo mẫu khi bạn đang nâng kính lên. Bạn có thể sử dụng một cọ điều khiển để di chuyển nhẹ nhàng dưới kính khi bạn nâng nó lên, sau đó dùng chổi để nắm lấy mẫu và giữ mẫu xuống trong khi bạn di chuyển phần còn lại của anti-roll guide ra khỏi chỗ.
Đối với mỗi người và tùy vào mẫu vật, mức độ ảnh hưởng có thể khác nhau khi bạn đang nâng kính, dẫn đến vấn đề mất mẫu vì mẫu bị kéo đi cùng với kính anti-roll guide. Đây là một vấn đề mà khách hàng thường gặp phải, và việc nâng kính anti-roll rất nhẹ nhàng là cách tốt nhất để đảm bảo rằng bạn có thể đặt cọ điều khiển hoặc một dụng cụ như cây dò dưới kính.
6. Yếu tố nào có thể khiến mô bị rách khi lát cắt trên kính hoàn toàn tốt và không có trong lát cắt đó?
Việc mẫu mô bị rách có thể do quá trình đông lạnh không đồng đều, hoặc có thể do lưỡi dao bị trầy xước, điều này có thể gây ra một mặt cắt không đều do dao hoặc lưỡi cắt. Bạn có thể di chuyển lưỡi dao và thử cắt ở một khu vực khác hoặc thử thay đổi lưỡi dao.
Có thể cũng có những điểm yếu trong mẫu mô hoặc sự khác biệt về mật độ của mô. Tôi đã nghe nói rằng khi làm việc với máy cắt tiêu bản rung (vibrating microtome), việc vùi mẫu với agarose sẽ tạo ra sự khác biệt lớn về mật độ giữa mô và môi trường hỗ trợ, khiến chúng tách ra khỏi nhau. Ý tưởng này cũng tương tự với mô, nơi có sự khác biệt về mật độ. Khi cắt, lực của dao cắt qua mô có thể dễ dàng đi qua một phần của lát cắt so với một phần có mật độ dày hơn, điều này có thể kéo một bên và để bên kia dễ dàng qua, tạo ra sự tách biệt và gây ra rách.
Khi bạn thêm nhiều chất gắn trên mô trước khi đông lạnh, việc ấn xuống mẫu có thể đã nén mẫu, gây ra những khu vực có sự khác biệt về mật độ, lại có thể gây ra vấn đề làm rách mô.
Nếu slide quá xa về phía trước trên anti-roll guide và cọ vào mặt của khối mẫu, nó có thể tạo ra một vết rách trong mẫu khi cắt. Khi bạn xử lý mẫu, có thể vô tình công cụ như cọ, nhíp, hoặc một vật dụng nào đó, đã chạm vào mẫu.
7. Ý kiến của ông về dao cắt high-profile và low-profile
Chúng tôi cung cấp cả hai, cũng như nhiều nhà sản xuất khác. Tôi nhận ra rằng ngay từ khi tôi còn là một Histotech, thì đó đã trở thành sở thích cá nhân nhiều hơn.
Dao cắt high-profile có diện tích bề mặt lớn hơn mà giá đỡ lưỡi dao có thể kẹp vào và giữ lưỡi dao, vì vậy khi bạn làm việc với các vật liệu cứng hơn, chẳng hạn như xương chưa khử canxi hoặc vật liệu rất xơ, nó sẽ hỗ trợ lưỡi dao tốt hơn. Có rất nhiều khách hàng vẫn sẽ sử dụng lưỡi dao có cấu hình thấp cho các chức năng tương tự và rất hài lòng với điều đó. Đôi khi đó là sở thích cá nhân.
Nguồn: https://www.leicabiosystems.com/educational-resources/articles/cryosectioning-101-for-research-qa/