John Stock – Chuyên gia hỗ trợ kỹ thuật cao cấp của Leica Biosystems cung cấp hướng dẫn toàn diện về cách đạt được kết quả cắt lạnh tốt nhất. John Stock sẽ trình bày về cách lắp đặt và cài đặt thiết bị, chuẩn bị mô mẫu, đông lạnh mô và cắt lát mô chất lượng
Q&A về kỹ thuật cắt lạnh dùng trong nghiên cứu
Dưới đây là phần Q&A của John Stock bao gồm lời khuyện về việc làm rách mô, giữ mẫu ở nhiệt độ thấp khi làm việc và ưu tiên high hoặc low-profile.
1. Tips để cắt các phần ở nhiệt độ -20 °C để dán vào lam kính cũng phải ở nhiệt độ -20 °C đối với các mẫu không thể làm ấm cho các ứng dụng tiếp theo không?
Một trong những vấn đề chính với các lam kính lạnh là chúng có thể thu hút độ ẩm. Chúng thường ở gần phía trước của buồng đông lạnh và được di chuyển xung quanh trong cột không khí, điều này sẽ thu hút độ ẩm và độ ẩm giữa mẫu và kính có thể cản trở việc dán lam. Vì vậy, hãy cố gắng đảm bảo rằng lam kính khô và không có độ ẩm. Khi đang làm việc trong buồng lạnh, độ ẩm từ hơi thở của người dùng cũng có thể đi về phía trước vào buồng. Vì vậy, cần đóng buồng lại, đồng thời điều này cũng có thể giúp giữ lại độ ẩm trong buồng bên trong và vẫn tuần hoàn.
2. Nhiệt độ phải giảm nhanh như thế nào từ -20°C xuống -50°C khi sử dụng chức năng đông lạnh mẫu nhanh của CM3050S và điều này có quan trọng để đạt được kết quả không?
Điều này đề cập đến mẫu: chức năng đông lạnh mẫu có thể giảm xuống đến -50°C – không quan trọng. Bởi vì đó là vùng rất nhỏ mà nó đang làm lạnh và nó sẽ nguội xuống không quá 4h. Vì mẫu được đông lạnh đã ở mức -20 °C, việc giảm xuống -50 °C có thể mất khoảng 15 phút đến nửa giờ tùy thuộc vào nhiệt độ buồng, nhưng nó sẽ nguội rất nhanh vì đó là hệ thống làm mát riêng biệt cho mẫu
3. Liên quan đến giới hạn khoảng cách đến các thiết bị khác khi bố trí máy cắt lạnh trong phòng thí nghiệm, điều này có áp dụng cho máy cắt lạnh kích thước lớn như Leica Biosystems CM3600 không?
Máy cắt lạnh kích thước lớn có thể làm lạnh toàn bộ rhesus monkey, như Leica Biosystems CM3600S. Khoảng cách xung quanh máy cắt lạnh có thể không cần thiết cho hoạt động của hệ thống làm lạnh vì nó được tích hợp hệ thống buồng lạnh kép. Cửa máy mở từ một phía, nhưng để có thể làm việc hoặc đi lại xung quanh thiết bị, tôi cho rằng cần ít nhất một feet xung quanh toàn bộ thiết bị, để có đủ không khí mát có thể tiếp cận các mặt sau và các lỗ thông hơi làm lạnh trên thiết bị.
4, Mực sử dụng trong quá trình vùi mô có ảnh hưởng gì đến bất kỳ ứng dụng nào không?
Chúng tôi không thể đảm bảo điều đó. Mực ở đó để giúp xác định các vùng mô và một số sắc tố đó có thể có tác động sau này khi mực khô. Vì vậy, tôi không chắc chắn và tôi phải xem các tờ SDS để xem dung môi nào giúp phân tán sắc tố, ví dụ, nếu đó là dầu hoặc thường chỉ là cồn hoặc nước, nhưng khi dung môi đó bốc hơi, và tôi không chắc điều đó sẽ diễn ra nhanh như thế nào, nó vẫn sẽ để lại sắc tố và các sắc tố có thể là các mảnh vụn nền có thể xuất hiện trên các mẫu sau này.
5. Về thanh chống cuộn, nó có thể gây cản trở khi bạn lấy phần cắt, hoặc đôi khi nó không hỗ trợ việc lấy phần cắt và bị cuộn lại. Làm thế nào để bạn khắc phục vấn đề này?
Thanh chống cuộn thường sẽ gập xuống trên giá đỡ lưỡi dao trước khi bạn cắt mẫu, và khi bạn đã có phần cắt, nó sẽ nhấc lên ra khỏi đường cắt, lật lên sang bên trái hoặc gập về phía trước. Thường có tĩnh điện có thể kéo phần cắt khi bạn nâng kính lên. Cần có một dụng cụ cọ có thể điều khiển dưới kính khi nâng nó lên, sau đó sử dụng để giữ phần cắt và giữ nó xuống trong khi di chuyển phần còn lại của kính chống cuộn ra khỏi đường cắt
Đối với từng người và từng mẫu, mức độ ảnh hưởng có thể khác nhau khi bạn nâng lên và gây ra vấn đề mất phần mẫu bị cuốn theo kính chống cuộn. Đây là một vấn đề mà khách hàng thường gặp phải, và việc nâng kính chống cuộn là cách tốt nhất để đảm bảo rằng bạn có thể đặt cọ điều khiển hoặc một loại que nào đó dưới kính.
6. Yếu tố nào có thể khiến mô bị rách khi mẫu cắt chất lượng tốt?
Việc mô bị rách có thể là do quá trình đông lạnh không đồng đều hoặc có thể là do cắt không đều do dao hoặc chính lưỡi dao. Bạn có thể di chuyển lưỡi dao và thử một vùng khác hoặc dùng một lưỡi dao khác.
Có thể là sự khác biệt về mật độ của mô. Tôi đã nghe rằng khi làm việc với microtome rung, việc vùi mẫu vào agarose gây ra sự khác biệt rất lớn về mật độ giữa mô và môi trường hỗ trợ và nó tách ra khỏi môi trường. Đây là cùng một ý tưởng với mô nơi bạn có các mật độ khác nhau. Khi cắt, lực của lưỡi dao đi qua mô có thể dễ dàng ở một phần của mẫu hơn so với phần có mật độ cao hơn, điều này có thể kéo một bên và cho phép bên kia đi qua rất dễ dàng, làm rách mô.
Khi đặt thêm vật liệu gắn lên trên mô trước khi đông lạnh, lực ấn xuống có thể làm nén mô, khiến các vùng có mật độ khác biệt có thể lại bị rách. Nếu kính ở quá xa về phía trước trên thanh chống lăn và cọ xát vào mặt khối, nó có thể tạo ra vết rách trên mẫu khi lấy một phần. Khi bạn đang xử lý mẫu, có thể vô tình, các công cụ, cọ, kẹp hoặc thứ gì đó tương tự có thể vô tình chạm vào mẫu.
7. Ý kiến của bạn về dao cắt high-profile và low-profile
Chúng tôi cung cấp cả hai, cũng như nhiều nhà sản xuất khác. Tôi nhận ra rằng ngay từ khi tôi còn là một Histotech ở phòng thú nghiệm, thì đó đã trở thành sở thích cá nhân nhiều hơn.
Dao cắt high-profile có diện tích bề mặt lớn hơn mà giá đỡ lưỡi dao có thể kẹp vào và giữ lưỡi dao, vì vậy khi bạn làm việc với các vật liệu cứng hơn, chẳng hạn như xương chưa khử canxi hoặc vật liệu rất xơ, nó sẽ hỗ trợ lưỡi dao tốt hơn. Có rất nhiều khách hàng vẫn sẽ sử dụng dao cắt low-profile cho các chức năng tương tự.
Nguồn: https://www.leicabiosystems.com/educational-resources/articles/cryosectioning-101-for-research-qa/
Minh Khang là nhà phân phối và nhập khẩu trực tiếp các Máy cắt lạnh vi phẫu mô tế bào từ hãng Leica Biosystems.
EN