Đánh giá về sụn khớp là đánh giá bất kỳ tổn thương bề mặt nào biểu hiện do hao mòn thông thường hoặc do phẫu thuật. Sau khi khớp được khử canxi , sự mất đi proteoglycan trong sụn khớp khiến khớp xuất hiện các nếp và gợn sóng trong quá trình nhuộm. Khi điều này xảy ra, sẽ không thể thực hiện phép đo mô hình hoặc đo sụn. Bài viết này sẽ cung cấp một số khuyến nghị hữu ích để giảm hoặc loại bỏ nếp cắt của sụn khớp.
Phẫu tích / Cố định mô
Mỗi bước trong quy trình mô học đều rất quan trọng, từ bóc tách cho đến bao gồm cả cắt bỏ, đặc biệt là đối với các mẫu sụn khớp. Điều quan trọng là mẫu phải được cắt đúng cách. Ví dụ, một chi sau của chuột phải được cắt kỹ càng, để lại càng ít mô mềm và mô liên kết càng tốt. Khi phẫu tích xung quanh khớp, mô được giữ nguyên để bảo vệ khớp (Hình 1). Nếu mẫu được gộp không chính xác hoặc không được làm ướt, chúng sẽ không bị khử canxi cũng như không được xử lý tốt, dẫn đến kết quả không tốt. Các mẫu xương phải được cố định tối thiểu 72 giờ trong Formalin đệm trung tính 10%. Sau đó, các mẫu được rửa kỹ để loại bỏ muối khỏi quá trình cố định và sau đó được đặt vào chất khử canxi, chẳng hạn như EDTA, trong 7 đến 14 ngày, tùy thuộc vào mẫu và kích thước của nó. Chất khử canxi phải mới và được thay thường xuyên. Điều quan trọng là phải sử dụng thử nghiệm điểm cuối quá trình khử canxi, chẳng hạn như chụp X-quang, thử nghiệm hóa học bằng ammonium oxalate hoặc thử nghiệm trọng lượng. Điều bắt buộc là phải loại bỏ hết canxi khỏi xương và điều quan trọng không kém là không để mẫu của bạn trong dung dịch khử canxi quá lâu. Để mẫu trong chất khử canxi quá lâu sẽ làm mất đi quá nhiều proteoglycan, làm tăng khả năng các phần sẽ bị gấp nếp lại
Xử lý mô sụn khớp
Các chương trình xử lý xương yêu cầu chu kỳ xử lý dài hơn, thường là 1 giờ mỗi trạm trong các bộ xử lý tự động. Các mẫu lớn hơn, chẳng hạn như thỏ và chó cần chương trình dài hơn.The Animal Processing Manual của Hiệp hội Quốc gia về Công nghệ mô, Thú y, Công nghiệp và Ủy ban Nghiên cứu là tài liệu tham khảo có giá trị để xử lý tất cả các loại mô. Chúng tôi sử dụng parafin với nồng độ polyme nhựa (Paraplast Plus) cao hơn khi xử lý, vì nó xâm nhập vào mô xương tốt hơn. Mô phải được cố định hoàn toàn trước khi xử lý. Độ dày mẫu mong muốn là 3-4 mm, hoặc độ dày bằng một đồng xu. Nếu số lượng mẫu bị tràn ra cassette, thuốc thử sẽ không thể khử nước, làm sạch hoặc thấm vào mô.
Vùi mô paraffin
Vùi mô paraffin là một bước quan trọng trong quy trình mô học khi thực hiện phẫu tích các mẫu xương và khớp, cũng như với bất kỳ mẫu nào. Hướng của mẫu của bạn là rất quan trọng. Nếu xương bị cắm vào một góc, nó có thể khiến xương bị gãy và “tách ra” khỏi khối. Paraffin cứng hơn (Paraplast) giúp việc cắt xương dễ dàng hơn; nó cho phép hỗ trợ nhiều hơn và ổn định hơn. Vùi mô càng phẳng càng tốt. Nếu có mặt cắt thì vùi mặt cắt đó vào khuôn (Hình 2).
Vi phẫu
Cần có máy cắt lát tiêu bản có công suất lớn khi cắt bất kỳ loại mẫu xương nào. Khi cắt tỉa các khối nên cắt từ từ và thay dao cắt khi cần thiết. Nếu bạn cắt quá nhanh, bạn có thể khiến xương hoặc khớp bị tách ra. Đặt khối của bạn lên khay đá với một lớp nước mỏng và ngâm khối trước khi cắt. Khối càng lạnh thì xương càng dễ cắt. Khi khối lạnh, parafin mạnh hơn. Khi cắt, nếu canxi vẫn còn trong mẫu, nó có thể khiến mẫu bị vỡ ra hoặc phần bị nhấc lên khỏi tiêu bản, làm tăng khả năng sụn khớp bị gấp lại. Xương và khớp khó bám dính vào các tiêu bản. Việc lựa chọn tiêu bản cần được cân nhắc cẩn thận; một tiêu bản tích điện nhiều hơn sẽ làm giảm khả năng xuất hiện nếp cắt và gợn sóng. Vì xương có thể khó gắn vào nên bạn phải nghiêng bộ phận giữ mâm cặp/khối của mình để đạt được mức hoặc mặt phẳng thích hợp.
Nhuộm
Khi chuẩn bị các phần của bạn để nhuộm thường quy hoặc nhuộm đặc biệt, cẩn thận để ngăn sụn khớp bị gấp. Đặt các phiến kính qua đêm ở nhiệt độ 60° C để loại bỏ parafin cũng như mô dính vào các lam kính. Tuy nhiên, người ta nhận thấy điều này không xảy ra với các mẫu có sụn khớp. Trên thực tế, sau để qua đêm, khả năng các nếp gấp sẽ tăng lên rất nhiều. Để các phần khô hoàn toàn qua đêm ở nhiệt độ phòng. Sau khi sấy khô, đặt các tiêu bản theo chiều ngang trên máy sấy tiêu bản ở nhiệt độ 37° C trong tối thiểu 12 giờ. Nhiều khi, các tiêu bản được để trên máy sấy tiêu bản vào cuối tuần. Tất cả quá trình nhuộm màu đều được thực hiện thủ công, điều này cho phép xử lý các mẫu của mình theo cách nhẹ nhàng nhất. Nếu bạn di chuyển quá nhanh hoặc làm rung các tiêu bản, điều này có thể khiến nếp xương và khớp bị gấp lại và bị loại bỏ ra khỏi tiêu bản. Sau đó, chạy các lam kính với xylene, 100% EtOH, 95% EtOH và 70% EtOH mỗi loại trong 5 phút để làm sạch mẫu với nước. Sau khi làm sạch các mẫu, để chúng ở nhiệt độ phòng trong 30 phút để khô hoàn toàn trước khi nhuộm (Hình 3a và Hình 3b). Đây là bước quan trọng để giảm sự gấp nếp của sụn khớp. Sau khi phần cắt khô hoàn toàn, hãy tiến hành quy trình nhuộm màu như bình thường. Yếu tố quan trọng khác để ngăn ngừa sụn khớp bị gấp là làm khô các phần sụn khớp một lần nữa sau một loạt 70% EtOH, 95% EtOH và 100% EtOH cho bước bù nước. Sau khi các tiêu bản khô hoàn toàn, ngấm chúng vào xylene và phủ lam kính lên.
Các bước tương tự được sử dụng trong quá trình rửa nước và bù nước có thể được sử dụng trong khi thực hiện hóa mô miễn dịch để tránh sụn khớp bị gấp.
Hóa mô miễn dịch
Các giao thức hóa mô miễn dịch yêu cầu thu hồi kháng nguyên do nhiệt gây ra có thể gây tổn hại cho cả sụn và xương. Nhiệt độ cao có thể khiến xương và khớp bị tách ra khỏi tiêu bản hoàn toàn hoặc gợn sóng gây ra hiện tượng giả. Nếu quy trình hóa mô miễn dịch yêu cầu sử dụng phương pháp thu hồi nhiệt, hãy giảm nhiệt độ và kéo dài thời gian ủ bệnh.
Khi sử dụng phương pháp đo mô hình để đo sụn khớp sau chấn thương hoặc tổn thương bề mặt, sụn khớp không thể gấp lại được. Việc gấp sụn sẽ đưa ra các phép đo không chính xác cũng như không thể hiện đúng mẫu của bạn.
Việc xử lý cẩn thận và nhẹ nhàng các mẫu và phần sụn khớp là điều cần thiết. Thực hiện theo các bước mô học thích hợp từ việc cắt mô đến dán lam là rất quan trọng để có được các phần sụn khớp chất lượng.
Minh Khang là nhà phân phối và nhập khẩu trực tiếp các thiết bị Giải phẫu bệnh từ hãng Leica Biosystems.
EN