4 tips quét tiêu bản mô bệnh học kỹ thuật số từ Leica

Tips quét tiêu bản mô bệnh học kỹ thuật:

TIP 1: Chuẩn bị mô

Điều quan trọng là chuẩn bị mô tốt – mát quét kỹ thuật số tốt nhất không nên quét cho các mẫu chất lượng kém. Dưới đây là một số khía cạnh của việc chuẩn bị mô có thể ảnh hưởng đến quá trình số hoá.

1. Cắt – Máy quét mô bệnh học kỹ thuật số có phạm vi tiêu cự nhỏ hơn so với kính hiển vi truyền thống, vì vậy hãy ghi nhớ điều này. Khi quét ảnh đơn mặt phẳng, độ dày mô tiêu chuẩn (3 – 5 μm) sẽ cho kết quả tốt nhất. Đối với các phần dày, có thể cần quét nhiều mặt phẳng (z-stack).
2. Nhuộm – Nhuộm rất mờ hoặc nhuộm nền quá mức sẽ khiến máy quét khó tự động nhận dạng mô hơn và có thể phải thực hiện công việc dùng tay nhiều hơn.
3. Khung lắp – Cũng như kính hiển vi truyền thống, máy quét mô bệnh học kỹ thuật số hoạt động tốt nhất trên bề mặt mô phẳng. Tránh các nếp gấp hoặc nếp nhăn trong mô để lấy nét tối ưu.
4. Dán lam – Lam kính thuỷ tinh thích hợp nếu bạn định quét tiêu bản, vì lam kính bằng nhựa có thể cong vênh theo thời gian và ảnh hưởng đến tiêu cự của máy quét. Cũng giống như kính hiển vi truyền thống, hãy đảm bảo rằng không có bọt khí nào bị mắc kẹt dưới lớp phủ, để tránh các khu vực bị mất nét khi quét.

TIP 2: Kiểm tra và chuẩn bị tiêu bản

Để cải thiện kết quả với các tiêu bản của bạn, hãy luôn kiểm tra và làm sạch chúng trước khi quét.

1. Kiểm tra các tiêu bản xem có nhãn dán nhô ra, băng dính hoặc khung lắp dư ra có thể ảnh hưởng đến sự vừa vặn của tiêu bản trong cơ chế quét và cản trở hoạt động không.
2. Lau cẩn thận các tiêu bản bằng vải mềm (ví dụ: sợi nhỏ) để loại bỏ các mảnh vụn rời, vết nước hoặc dấu vân tay ở bề mặt trên và dưới. Đối với những vết bẩn khó tẩy, làm ẩm giẻ bằng nước hoặc dung dịch cồn để làm sạch.
3. Kiểm tra các vết nứt hoặc sứt mẻ trong tiêu bản, đặc biệt là ở các góc. Bất kỳ mảnh thủy tinh rời nào cũng có thể rơi ra trong quá trình quét và làm hỏng cơ chế quét.
4. Chờ cho đến khi các lam kính khô hoàn toàn trước khi đưa vào máy quét, để tránh cặn dính vào cơ chế máy quét.
5. Đảm bảo các lam kính được đặt phẳng vào giá đỡ hoặc giá đỡ máy quét và mọi cơ chế cố định đều được gắnvào. Nếu tiêu bản không phẳng trong khi quét, có nhiều khả năng các khu vực không được lấy nét trong quá trình quét của bạn. Các nhãn dán ở dưới cùng của tiêu bản có thể ngăn tiêu bản bị bong phẳng, vì vậy hãy đảm bảo rằng chúng chỉ được đặt ở mặt trên cùng của tiêu bản.

TIP 3: Quét tiêu bản của bạn

Mỗi mô hình máy quét mô bệnh học kỹ thuật số có quy trình làm việc và yêu cầu riêng. Tuy nhiên, có một số nguyên tắc chung cần tuân theo để có được bản quét tốt.

1. Máy quét sẽ tự động phát hiện tất cả mô trên lam kính, đồng thời loại trừ các đối tượng không liên quan như nhãn, vết bút hoặc mảnh vụn. Tuy nhiên, nhuộm màu mô mờ, nhuộm màu nền quá mức, đổi màu khung lắp hoặc quá nhiều mảnh vụn/dấu vết trên tiêu bản có thể dẫn đến việc phát hiện mô kém. Nếu có thể, hãy xem lại quá trình phát hiện mô trên các tiêu bản không tối ưu trước khi quét độ phân giải cao, để tránh phải quét lại sau này.
2. Việc lấy nét phải tự động và các điểm lấy nét – nếu có – phải được phân bố đều trên mô. Nếu các khu vực của tiêu bản không quét đúng nét, hãy thử đặt các điểm lấy nét bổ sung bằng tay.
3. Tránh đặt các điểm tập trung vào các khu vực có mảnh vụn trên/dưới lớp phủ, bọt khí hoặc các lỗi khác. Những thứ này có thể khiến máy quét tập trung vào mặt phẳng quét không chính xác, dẫn đến mô bị mất nét.
4. Để quét dầu ở độ phóng đại cao hơn, hãy đảm bảo bôi đủ dầu trước khi quét để tránh làm khô vật kính trong quá trình quét, điều này có thể để lại các vệt trên hình ảnh được quét. Tuy nhiên, quá nhiều dầu có thể thấm dưới máy dán lam, để lại hình ảnh “tráng bóng” trên bản quét với độ tương phản kém dọc theo các cạnh của tế bào. Quét thử là một thực hành tốt với quét dầu. Đảm bảo làm sạch mọi cặn dầu trên giá đỡ hoặc cơ chế quét sau khi quét.

TIP 4: Kiểm soát chất lượng (QC)

Quét sẽ không phải được chấp nhận ngay lần đầu tiên. Các quy trình QC sẽ khác nhau tùy theo phòng thí nghiệm và bạn phải luôn tuân thủ các yêu cầu QC của tổ chức của mình. Tuy nhiên, đây là một số bước bạn có thể làm theo để kiểm tra chất lượng quét nhanh chóng và hiệu quả trong quá trình xem hình ảnh của mình.

1. Xem lại toàn bộ tiêu bản – hoặc ít nhất là toàn bộ khu vực mô được quét – ở độ phóng đại thấp (ví dụ: 4x), kiểm tra các vùng nằm ngoài tiêu điểm hoặc sai lệch có thể nhìn thấy. Các sai lệch thường sẽ được hiển thị dưới dạng một “đường diễu” xuyên qua hình ảnh, nơi các sọc được quét tạo nên hình ảnh.
2. Phóng đại hình ảnh có độ phân giải cao được chụp và xem xét theo một đường ngang duy nhất trên phần mô tại điểm rộng nhất của nó, mỗi lần một góc nhìn. Điều này sẽ cho phép bạn kiểm tra các khu vực nhỏ lấy nét kém hơn hoặc sai lệch ít hơn.
3. Thực hiện cùng một đánh giá từng góc theo hướng thẳng đứng, từ mép này sang mép kia của mô theo một đường liền mạch, kiểm tra lại xem có bất kỳ vùng nào bị mất nét không.
4. Kiểm tra tại chỗ một vài khu vực trên lam kính ở độ phóng đại cao, đặc biệt là bất kỳ vùng nào mà mô có độ dày khác nhau hoặc nơi có bất kỳ lỗi nào trên lam kính. Đây là những khu vực có khả năng tập trung kém nhất.

Thực hiện theo các nguyên tắc đơn giản này khi quét để giúp bạn tạo ra các hình ảnh kỹ thuật số có chất lượng cao hơn và cung cấp cho bạn bản ghi lâu dài các tiêu bản mà bạn có thể xem, chia sẻ và phân tích.